生物技术

在十几年的“肽力P抗癌分子化合物”的研发过程中采用了许多高端可靠的生物形态学,生化检测检测技术,并且对这些技术进行一定程度上的更新补充,以适应肽力P分子化合物特性的需要,是保证成功研发出肽力P化合物产品的关键,其中包括:

a. 肽力P化合物对凋亡细胞作用下形态学检测技术的应用

肽力P化合物作用各种癌细胞时,利用显微镜观察未染色细胞和染色细胞成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜以观察细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。超微结构的透射光学显微镜和倒置电子显微镜观察对可见肽力P化合物作用各种癌细胞后,凋亡细胞的分期等气穴现象(cavitations)的空泡结构和产生凋亡小体。以及显微镜观察到未染色细胞和染色细胞成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜以观察细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。同时通过超微结构的透射光学显微镜和倒置电子显微镜观察对凋亡细胞的分期等气穴现象(cavitations)的空泡结构和产生凋亡小体。因此证实了肽力P化合物可以促使各种癌细胞凋亡。

b. 利用生化技术对肽力P分子化合物作用下各种癌细胞凋亡检测:

流式细胞仪( Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和计算机技术等集于一体,既可定性又可定量,且具有简单、快速和敏感性高的特点, 可进行多参数和活体细胞分析。我们利用FCM光散射法检测到肽力P化合物作用于不同癌细胞后, 癌细胞呈现固缩,体积变小,核碎裂形成,细胞内颗粒往往增多的细胞凋亡现象,而没有肽力P化合物作用的癌细胞 ,细胞保持常态。同时还通过肽力P化合物作用于不同癌细胞后的这些细胞DNA含量的测定,发现该类细胞的核酸内切酶激活,导致DNA 断裂, 这是细胞凋亡的特征性表现, 因此我们通过FCM可以鉴别凋亡和分析检细胞DNA含量,从而提高鉴别凋亡细胞与正常细胞的能力更进一步证实肽力P化合物可以促使各种癌细胞凋亡的结论。

另外我们更进一步证实肽力P化合物可以促使各种癌细胞凋亡的结论,还利用了为 Y 啶橙染色法( Acridine Orange ,AO),若丹明( Rh123) 染色法,原位末端标记技术, 特别是Annexin V/ PI 法,AnnexinV 是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,利用其特性可以检测细胞凋亡,也是检测和定量凋亡细胞 的一种较为可靠的方法。同时该法检测早期凋亡更为灵敏,是我们用于肽力P化合物可以促使各种癌细胞凋亡定量检测方法。以及ssDNA 单抗法,把抗单链DNA(ssDNA) 单克隆抗体用于区别坏死和凋亡、甚至能检测到肽力P化合物可以促使各种癌细胞凋亡前期凋亡细胞。以及细胞凋亡的相关蛋白分析用于肽力P化合物作用下各种癌细胞凋亡凋亡调节基因蛋白如caspases等家族蛋白检测细胞膜表面或细胞内荧光分子数量,以快捷准确的了解肽力P化合物作用下各种癌细胞凋亡每个细胞的变化。

其他如线粒体膜电位变化的检测: TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling),LM-PCR Ladder,mRNA检测(由于细胞凋亡时表达异常的基因,通过检测fas,bax-alpha 和 bcl-X (长的) 基因的 mRNA表达水平来进行细胞凋亡的检测)。等,以上可靠的高端生物技术合理应用,可以参考已经有关肽力P分子化合物作用下各种癌细胞凋亡检测的十几篇发表在不同的国际一流专业期刊中的实验方法部分。

应该肯定,万医诺的科学家都是博士以上学位,并且绝大多数都有20年以上在生物医药领域丰富的研发经历,这将保证了任何与肽力P分子化合物进一步深入研发所需的高端生物技术都能成功的实施。